▶ 服务介绍

       酵母单杂交技术的基本原理是基于转录因子的两个功能域——DNA结合域（BD）和转录激活域（AD）的分离特性。当一个已知的DNA序列作为“诱饵”被插入到酵母表达载体中，并且该序列能够与某个转录因子的BD融合表达时，如果这个转录因子同时拥有AD或者能与其他携带AD的蛋白相互作用，则可以激活下游报告基因的表达。通过检测报告基因的活性，如HIS3、LacZ或GFP等，就可以判断是否发生了特定的DNA-蛋白质间的相互作用

▶ 实验步骤

1. 构建酵母单杂交文库
    从目标细胞或组织中提取mRNA并合成cDNA。
    将cDNA克隆入含有转录激活结构域的酵母表达载体中。
    转化入酵母细胞形成文库，确保文库具有广泛的覆盖性和高质量。
2. 构建酵母单杂交载体
    将目标DNA片段（例如基因启动子或调控序列）与DNA结合域融合。
    插入至酵母表达载体以构建诱饵载体。
3. 共转化酵母细胞
    使用锂乙酸法或PEG法将构建好的诱饵载体和文库中的cDNA表达载体共同转化进特定菌株（如Y1HGold、Y187）。
    保证转化效率，确保文库的完整性和代表性。
4. 筛选与验证
    在选择性培养基上筛选转化后的酵母细胞，这些培养基通常缺乏某些营养成分或是添加了抑制剂，只有那些能够激活报告基因的细胞才能生长。对筛选出的阳性克隆进行进一步的验证实验，包括重复筛选、测序等分子生物学方法来确认相互作用。