▶ 服务介绍

       EMSA（Electrophoretic Mobility Shift Assay），即电泳迁移率变动分析，是一种用于研究蛋白质与DNA或RNA之间相互作用的技术，能够进行定性和定量分析。其基本原理在于，当蛋白质与DNA或RNA结合形成复合物后，在电场中迁移的速度会比未结合的核酸探针慢。这种迁移速率的变化可以通过PAM凝胶电泳（PAGE）来检测，从而判断蛋白质与核酸之间的结合情况

▶ 实验步骤

1. 探针的标记
    探针的标记是EMSA实验的关键步骤之一，通常使用同位素标记，如[γ-32P]ATP，以确保标记过程准确，避免非特异性标记，以免影响实验结果。标记反应体系包括待标记探针、T4多聚核苷酸激酶缓冲液、无核酸酶水、同位素和T4多聚核苷酸激酶。标记完成后，可取少量探针用于检测标记效率。

2. 探针的纯化
    为了提高EMSA的电泳结果质量，标记后的探针可能需要纯化。纯化过程通常包括加入醋酸铵和无水乙醇，通过低温沉淀和离心去除杂质，最后用TE缓冲液溶解沉淀物。

3. EMSA胶的配制
    EMSA胶通常使用PAM凝胶，根据实验需求配制不同浓度的胶。

4. EMSA结合反应
    在结合反应中，将标记的探针与蛋白质样品混合，让蛋白质与核酸探针结合。此步骤中，蛋白质样品的纯度对实验结果至关重要，需要避免样品中存在的杂质干扰实验结果，同时精确控制样品浓度以保证实验的准确性。

5. 电泳分析
    结合反应完成后，将样品加载到预先准备好的EMSA胶上，进行电泳分析。电泳条件如电压、电流和时间等需要根据实验的具体要求进行优化，以获得最佳的实验结果。结合了蛋白质的复合物会比未结合蛋白质的探针电泳速度慢，从而在胶上形成不同的条带。