▶ 服务介绍
蛋白乳酸化检测主要基于两种原理:
1.分子量变化检测:乳酸化修饰会在赖氨酸ε氨基上添加一个乳糖基团,使赖氨酸残基的分子质量增加72.021Da。这种分子量的变化可以通过质谱技术检测到。
2.分子构象变化检测:乳酸化修饰会引起蛋白质分子构象的变化,这种变化可以通过特异性抗体识别
▶ 服务介绍
1. 质谱分析
质谱分析是一种高灵敏度的乳酸化修饰组蛋白检测方法,可以通过质谱仪器的高分辨率和高精确性来鉴定和定量乳酸化修饰的组蛋白。LC/MS或LC-MS/MS检测赖氨酸肽段是否有乳酸基团的特征峰,这是经典方法,也是最早用于鉴定Kla修饰的方法。这个方法的优点是精准全面,不但能鉴定是否有Kla修饰,还能通过读谱确定修饰的具体位点。
2. 免疫沉淀和ELISA
免疫沉淀和ELISA技术则是利用具有特异性的抗体,识别和定量乳酸化蛋白质。这些方法具有简单、快速、灵敏的优点。乳酸化修饰特异性抗体可以通过免疫印迹、免疫组织化学等方法检测乳酸化修饰的组蛋白。免疫共沉淀是一种将乳酸化修饰的组蛋白与特定抗体结合,然后通过沉淀的方法将其分离出来的技术。
3. 免疫荧光染色实验
在免疫斑点实验的基础上,也可以用免疫组化或免疫荧光检测样本中乳酸化修饰。与免疫斑点实验和WB相比,这个办法更直观,图片更美观,还能提供乳酸化修饰在细胞器中的定位。
4. 乳酸代谢异常指标的检测
除了直接检测乳酸化修饰,还可以通过检测乳酸代谢异常指标来间接评估乳酸化修饰的水平。例如,通过检测NAD+/NADH比例、细胞内氧水平、线粒体生物合成、线粒体活性等指标。市面上有专门的试剂盒用于检测这些指标,其样本类型以细胞系为主。